Состав раствора для заливки дорожек: пропорции, формы, состав, красящая добавка
Садовые дорожки своими руками из заливной формы
Элегантные и ухоженные садовые тропинки являются обязательным атрибутом практически любой современной дачи или загородного дома. Согласитесь, приятно прогуляться по изысканной дорожке вглубь любимого сада или порадовать гостей красивой плиткой, которая ведет от калитки к домашнему крыльцу.
Садовые дорожки органично вписываются в зеленый ландшафт и разделяют дачный участок на своеобразные сектора, придавая территории ухоженный и завершенный вид. Они являются своеобразным ограждением огорода, сада или любимой клумбы.
Кроме того, плитку можно выложить в качестве площадки под лавочку или под стоянку автомобиля. Наконец, благодаря эластичным и прочным садовым дорожкам даже в плохую погоду можно спокойно пройти к пристройке или к гаражу, не опасаясь увязнуть в размокшем грунте. С выбором материала для садовой дорожки можно ознакомиться в этой статье.
Сегодня мы расскажем об одном из самых распространенных, доступных и несложных способов строительства садовой дорожки с использованием специальной «заливной» формы.
Готовые пластиковые формы для укладки садовой дорожки имеют множество интересных вариантов дизайна, благодаря чему формируется любой, даже самый сказочный «каменный» рисунок тропинки.
Далее, с ними очень легко работать: весь процесс проходит быстро и увлекательно. Переставлять формочку и заливать бетон несложно, к тому же, вы не будете тратить время на изготовление собственной формы из старого железного обруча и пр. материалов. Наконец, немаловажно, что такой способ обойдется дешевле, чем покупка готовой тротуарной плитки.
Форму для садовой тропинки купить не проблема – ее можно приобрести в специализированном магазине или заказать через интернет. Традиционные габариты формы: 60*60*6 или 40*40*4 см.
Подготовительный этап
Для начала определитесь с месторасположением новой дорожки. Сделайте ее предварительную разметку: забейте по периметру колышки, через которые протяните бечевку, чтобы обозначить границы тропки.
Теперь оцените плотность грунта. Если верхний слой земли рыхлый и непрочный, тогда выкопайте траншею – канавку глубиной около 8-12 см в зависимости от вида грунта, и шириной не менее 45-65 см исходя из параметров одной формы и с учетом отступа по краям для бордюра. При необходимости можно взять двойную или тройную ширину.
После — хорошо утрамбуйте землю и подсыпьте примерно 5-9 см слоя песка и мелкого щебня, затем снова все спрессуйте. Следите, чтобы земля нигде не просела, иначе вся работа испортится.
Если изначально грунт окажется плотным, тогда траншею копать не обязательно. Достаточно лишь утрамбовать землю, затем уложите тонкую прослойку песка и щебня не более 5 см и снова все тщательно уплотните.
В принципе, для формирования подсыпки можно обойтись и одним песком, а щебенку добавить позже уже при заливке тропинки. Исходная гравийно-песчаная подсыпка нужна в случае довольно рыхлой земли или когда ожидается большая эксплуатационная нагрузка, например, делается площадка под машину.
Установка формы
Полейте водой песок на месте будущей тропинки – это позволит уплотнить фундамент и сохранить достаточную влагу в бетоне. Песок можно временно укрыть полиэтиленом. Когда по плиткам планируется подъезд автомобиля или его стоянка, то сверху на гравийно-песчаную основу уложите арматурную сетку, которая обрезается болгаркой по размерам тропинки. Альтернатива армированию – фиброволокно.
Теперь при помощи кисточки или распылителя тщательно и тонким слоем смажьте вашу формочку мыльным раствором, специализированной смазкой (оптимально), или, в крайнем случае, переработанном автомобильным маслом. Благодаря смазыванию форма будет лучше выниматься назад. При использовании специальной смазки — «K-222» и пр. — достаточно обработать форму один раз, мыльным раствором — всякий раз перед установкой на новую позицию, машинным маслом – раз в 3 заливки.
Снова слегка обрызгайте песок водой при помощи распылителя, затем внимательно и ровно установите форму на подсыпку, легонько вдавив ее так, чтобы слой будущих плиток хотя бы немного выступал выше уровня окружающей поверхности.
Готовим раствор
Переходим к цементному раствору. Вариантов тут несколько.
- Можно взять стандартное соотношение: цемент 1 ч., чистый мелкозернистый песок 3 ч.
- Далее, есть и такой способ: цемент 1 ч., песок 3 ч., щебенка 4 ч (фракция средняя или мелкая).
- Также используется состав цемент 1 ч., песок 4 ч. + пластификатор.
Зачастую для прочности дорожки добавляют сразу и щебень, и пластификатор, а иногда еще и армирующее волокно.
Расход цемента может быть разным, но приведем такой ориентир из практики: 50 кг цемента M500 достаточно на 2,6-3,0 кв. м. дорожки при обычном соотношении к песку 1:3 и без щебня. Вот, например, формы по 40 см (высотой 4 см), 1 ряд в ширину плюс 17 форм по длине, итого вышло 40 см * 680 см = 2,72 кв. м.
Для плитки 60*60*6 см 50 кг цемента хватит примерно на 1,7-2,2 кв. м. С гравием или с пластификатором расход цемента везде будет как минимум на 15% ниже.
Итак, для начала тщательно смешайте в емкости насухо цемент марки M500 или M400 с мелкозернистым песком. Чтобы тропика получилась более прочной, туда можно добавить щебень.
Если у вас планируется цветная дорожка, тогда досыпьте в сухую смесь специальный краситель для бетона с дозированием примерно в 2-5% от общей массы цемента. Можно использовать и т. н. жидкий пигмент, который подливают в раствор. Упаковки пигмента на 750-800 г хватит примерно на 8-9 кв. м тропинки.
С покраской можно поступить так: покрасить тропинку в 1 колер, добавляя его в раствор или смесь, равномерно перемешав краситель; покрасить дорожку «пятнисто», когда краситель добавляется в бетон, но полностью не перемешивается; осыпать пигментом сверху по готовой, но еще не застившей плитке, окрасив только ее поверхность.
Далее, в воду или в сухую смесь рекомендуется добавить пластификатор, который обеспечит садовой дорожке лучшую защиту от влаги и температуры, сделает ее более эластичной, гибкой, гладенькой и крепкой. Пластификатор экономит расход цемента и усиливает бетон примерно 15-20%. В этом отношении можно посоветовать пластификатор «СП-1» (или «СП-3») с дозированием примерно 100-200 г на 25-кг упаковку цемента (0,3-0,8% от массы).
Также к сухим компонентам или сразу в раствор можно добавить армирующее полипропиленовое волокно на 12 или 18 мм. Особенно это хорошо для места под машину. Благодаря фибре можно обойтись и без предварительного армирования проволокой. Такое вещество значительно повышает крепость бетона, нивелирует любое появление трещин, делает материал стойким к истиранию. Одной упаковки волокна на 600 г хватает на 40-42 плит 60*60 см (около 15 кв. м).
Постепенно добавляя воду к сухой смеси, тщательно все размешайте все компоненты до сметанообразной консистенции. Следите, чтобы раствор не был слишком жидким, так как переизбыток воды может привести образованию трещин после застывания дорожки.
Укладка садовой тропинки
Выложите цементно-песчаный раствор сверху в установленную на подсыпку форму. Заполните ее как можно равномернее, не оставляйте нигде пустот, особенно в углах. Используя мастерок или широкий шпатель, тщательно все разровняйте, спрессуйте и уберите лишний раствор. Старайтесь, чтобы верх плитки был максимально выровненным.
Теперь подождите примерно 20-35 мин., пока раствор не загустеет. Аккуратно держась за противоположные диагональные углы, снимите форму, поднимая ее строго вверх так, чтобы не перекосить края. Допускается перед этим легонько простучать форму мастерком.
Все, первый фрагмент тропинки готов.
Затем снова обрызгайте песок водой, если нужно смажьте формочку, переставьте ее на соседнее место и заливайте раствор заново. Контролируйте бечевкой, уровнем или длинной рейкой вертикальность установки формы: вся дорожка должна находиться на одной плоскости по высоте. Кстати, для строительства можно использовать сразу несколько формочек – так работа пойдет быстрее.
После окончательной заливки прикройте дорожку пленкой или иным материалом, чтобы обезопасить его на время высыхания от следов животных или дождя.
Наступать на готовую тропинку можно через пару дней, давать нагрузки, ходить — после 4-5 дней, а ставить авто — не менее чем через 16-18 суток.
Завершающий этап
Заполните швы между плитами тропинки, а также ее края песком, хорошо его утрамбовав. Также можно забить швы землей, затем посадить там травку. Семена для газона высыпаются на уже втрамбованные швы, прокатываются обойным валиком, затем сверху их нужно еще раз слегка посыпать землей.
Наконец, по краям можно сделать более солидный бордюр при помощи специальной формы. Процесс работы тот же, но состав раствора будет следующим: цемент 1 ч., песок 2-3 ч. + пластификатор + фибра. Если взять песка 2 части – бордюр будет белым, если чуть больше – темно-серым. Краситель для бордюра добавляют при необходимости.
Теперь у вас новая красивая садовая дорожка. Удачного вам строительства!
Фото садовых дорожек
Можете полюбоваться на уже готовые варианты садовых дорожек и перенять понравившиеся идеи. Но смотрите, чтобы выбранная вами тропинка идеально вписывалась в ландшафтный дизайн вашего сада.
Николай Прилуцкий, © zakustom. ru
Бетон и краситель для бетонных дорожек: состав и пропорции
admin 25.05.2015 0 Comments
Чем отличается цементный раствор для изготовления садовых дорожек от обычного, он может быть окрашен пигментами или красителями, к раствору добавляются укрепляющие добавки или фиброволокно, которое применяется для микроармирования бетона.
Пропорции бетонной смеси – 1:2:2:2 (вода, цемент – М500, щебень – фракция 5-10, песок)
Пигменты и красители для бетона
Красящие пигменты и красители со временем не станут блеклыми и выцветшими. Одной упаковки весом 750 г хватит, чтобы окрасить 14-24 плиток в зависимости от того какая у вас форма 60 или 80 см.
Пигмент добавляется в %-м соотношении к сухому цементу все зависит от цвета пигмента, минимальное соотношение 0,2-2% максимальное 3-5%.
Таблица пропорций добавления пигмента к сухому цементу
Цвет пигмента | Минимальное соотношение, % | Достаточны % для получения насыщенного цвета | Максимальное количество, % |
1 | 3-4 | 5 | 5 |
0,2 | 1-2 | 3 | 3 |
Зеленый | 0,2 | 1-2 | 3 |
Оранжевый и желтый | 2 | 3-4 | 5 |
Коричневый | 2 | 2-3 | 5 |
2 | 4-5 | 5 | 5 |
Красный | 1 | 1,5-2 | 5 |
Красящие добавки марки HLV для садовых дорожек и бордюров отличаются своим применением, добавки можно применять на любом этапе изготовления раствора или уже на готовые дорожки путем нанесения красителя поверх бетона.
Из общего у красящих добавок и пигментов, это их ассортимент который чаще всего состоит из 4-х цветов, красный, коричневый, желтый и зеленый.
Укрепляющие добавки для бетона
Для того чтобы дорожка была не только красивой, но и прочной, можно использовать добавки для бетона, которые повышают прочность бетона и устойчивость к механическим воздействиям.
На сегодняшний день существует достаточное количество всевозможных добавок и упрочнителей, например, жидкий неорганический компаунд на основе лития. Такой упрочнитель наносится на готовое изделие из бетона, он проникает на 3 см вглубь пор бетона, в порах он кристаллизируется и тем самым повышает прочность бетона.
Кроме пропитки можно воспользоваться добавками, которые смешиваются с жидким бетонным раствором, например фиброволокно полипропиленовое оно применяется для микроармирования бетона, что сделает ваши дорожки еще более прочными и долговечными.
Кроме пропиток существуют и готовые добавки, которые рекомендуются именно для создания садовых дорожек из бетона, например HLV-15.
Беспроводные носики для розлива спиртных напитков | Системы управления алкоголем
начните работу с самым мощным решением для мониторинга спиртных напитков
Войдите в систему
отслеживайте каждую партию с помощью barvision опыт и продавать более прибыльные напитки с BarVision. Наши беспроводные носики для розлива спиртных напитков — это только начало мощного и эффективного решения.
Что такое барвижн?
Наше решение для мониторинга алкогольных напитков помогает барам постоянно наливать напитки и продавать более прибыльные напитки.
BarVision использует дозатор спирта IoT, чтобы отслеживать количество спиртного при каждом розливе.
Решение 21 века: наши интеллектуальные устройства для розлива спиртных напитков связывают данные о розливе с вашей POS-системой, чтобы идентифицировать каждый перелив и его влияние на прибыль вашего бара. Затем мы работаем рука об руку с вами, чтобы мотивировать персонал наливать точные и однородные напитки.
- Identify every overpour down to the minute
- Increase Revenue & Decrease Inventory Waste
- Promote Bartender Honesty & Accuracy
- No Hidden or Up-Front Fees
- Guaranteed ROI
- Больше, чем просто система управления спиртными напитками в баре
- Идентифицировать каждый овернажный до минуты
- Увеличьте доход от бара
- Уменьшение потраченного впустую инвентаризацию ликера
- Продвижение честности и точность Бартника
- Гарантировано ROI
- 9003 ?
Наше решение для мониторинга алкогольных напитков помогает барам постоянно наливать напитки и продавать более прибыльные напитки.
Затем наши алгоритмы сопоставляют каждую разливку с ее POS-транзакцией , чтобы определить каждую переливку и ее влияние на прибыль вашего бара.
Компания BarVision использует носик для розлива спирта IoT, чтобы регистрировать количество спиртного при каждом розливе.
Решение 21 века: наши интеллектуальные устройства для розлива спиртных напитков связывают данные о розливе с вашей POS-системой, чтобы идентифицировать каждый перелив и его влияние на прибыль вашего бара. Затем мы работаем рука об руку с вами, чтобы мотивировать персонал наливать точные и однородные напитки.
- Больше, чем система управления барной раствором
- Идентификация каждого овернового дохода до минуты
- Увеличение дохода за бар
- Снижение потраченного впусту
Отслеживание количества налитого напитка
Наши носики для бутылок с ликером видят, что наливают бармены, даже когда вас нет на месте.
Актив 5Анализ заливок по
времени и местоположениюОтчеты и консультанты делятся
icon-magnify
ежедневными, еженедельными и ежемесячными аналитическими данными.Подсчитать потери
Влияние на доходЗнайте, какое влияние на вашу прибыль оказывают переливы и непостоянство напитков.
Актив 2Зарабатывайте больше
ДеньгиИспользуйте ключевые показатели для стимулирования изменений и увеличения прибыли.
как это работает?
Начнем с датчиков Smart Spouts, которые фиксируют, что, когда и сколько налито. Затем мы сравниваем разливы алкоголя с оплатой напитков в POS. Затем, используя технологию искусственного интеллекта, мы выявляем и сообщаем о проблемах, влияющих на работу и прибыльность вашего бара.
Захват разливов
В режиме реального времени носики спиртных напитков и метки пивных кранов фиксируют каждый разлив.
Сбор POS-расходов
Мы собираем ваши POS-расходы и сравниваем их с разливами.
Определение производительности и
КЛЮЧЕВЫЕ ПОКАЗАТЕЛИМы определяем проблемные заливки и сообщаем о ключевых показателях и тенденциях.
Примите меры
Ваши консультанты работают с вами, обобщая проблемы, чтобы вы могли принять меры.
Как вам может помочь BarVision?
Отчеты BarVision предоставляют информацию о производительности, чтобы менеджеры могли обеспечить постоянное обслуживание клиентов, исключить дорогостоящее чрезмерное наливание и продавать напитки с большей прибылью; все это при удаленном мониторинге барменов.
Узнайте больше о наших цифровых умных носиках
Беспроводные носики для бесплатного розлива и датчики разлива
Наши запатентованные беспроводные умные носики и датчики разлива пива точно отслеживают каждый разлив. В отличие от традиционных средств управления алкоголем, BarVision позволяет барменам работать без ограничений.
- Нержавеющая сталь, стандартные четыре носика для разлива
- 100% БЕСПЛАТНО с подпиской, замена бесплатно
- Беспроводная связь, никогда не требует подзарядки легко чистится
- Стандартные разливочные устройства подходят ко всем типам бутылок для спиртных напитков
ОСНОВНЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ НАЛИВА
Улучшенные инструменты.
Улучшенная отчетность.
Больше контроля.Хотели бы вы наблюдать за каждой заливкой? Мы можем. Мы изучили миллионы транзакций Pour и POS и знаем факторы, которые могут истощить прибыль бара. Добавление BarVision означает, что больше не нужно гадать.
Хотели бы вы наблюдать за каждой заливкой? Мы можем. Мы изучили миллионы транзакций Pour и POS и знаем факторы, которые могут истощить прибыль бара. Добавление BarVision означает, что больше не нужно гадать. Наши современные инструменты управления баром отслеживают ежедневную активность, регистрируют проблемы и сообщают об улучшениях, связанных с улучшением инвентаризации и контроля розлива.
OVERPOURS
PREMIUM POURS
GIVEAWAYS & THEFT
OVERPOURS
PREMIUM POURS
GIVEAWAYS & THEFT
OVERPOURS
OVERPOURS & CONSISTENCY
What are Overpours Costing You?
Вы хотите, чтобы напитки лились рекой. Чем быстрее ваши бармены наливают, тем больше людей вы обслуживаете и тем больше зарабатываете, верно? Нет, если вы жертвуете точностью!
- Перелив не только увеличивает расходы на спиртное.
- Это также может привести к тому, что ваши гости будут заказывать меньше напитков.
Ежемесячно это может составлять сотни непроданных напитков. В сумме нереализованный доход может составить 10 000 долларов в месяц.
К счастью, мы можем помочь. Мы можем показать вам, когда, где, что и сколько алкоголя было налито.
ПРЕМИУМ НАЛИВКИ
ПРЕМИУМ ЗАМЕНЫ
Дополнительные продажи и воровство
Дополнительные продажи 902:40 — Взрыв элитных брендов спиртных напитков премиум-класса создал беспрецедентную возможность для дополнительных продаж. Хороший, знающий бармен может поднять посетителя с 4 долларов за рюмку до 8 долларов за рюмку, продав более дорогие спиртные напитки. Мы отслеживаем ваши премиальные наливы, чтобы вы могли отслеживать рекламные акции и награждать барменов.
Подмены и воровство — Бармены часто наливают спиртные напитки премиум-класса, но берут хорошие цены. Это влияет на доходы и стоимость бара. Мы можем помочь вам определить и решить эту проблему.
В сочетании с дополнительными продажами и взиманием платы за разлив премиум-класса можно значительно увеличить доход от бара и прибыль.
Giveaways & Theft
Drink Waveaways & Theft
Bartender & Office Assues
Национальная ассоциация ресторанов сообщает, что 75% нехватки закупоров являются результатом кражи работников:
- . платежи;
- Бесплатные напитки для друзей; и
- Наливать себе напитки после закрытия
Хотя один инцидент не разрушит ваш бар, со временем они могут накапливаться. Если вы не можете быть в баре 24 часа в сутки, что делать? БарВижн. Мы знаем, когда у нас сняли носики, что залили и что накрутили. Мы помогаем вам создать культуру честности и призываем барменов «налить и вывесить»… потому что мы это отслеживаем.
получить демоверсию. получить цитату.
Начало работы
«Отчеты BarVision в режиме реального времени демонстрируют важность обучения наших барменов важности консистенции коктейлей и размеренных наливов. Это бесценно при разработке более эффективных стратегий ценообразования. BarVision — консультант барной индустрии, который окупается снова и снова!»
Вон Хардин
Исполнительный консультант F&B
Выпускник Johnson & WalesОтзывы клиентов
POS-СОЕДИНЕНИЯ
BarVision надежно подключается к более чем 50 лучшим POS-системам для сбора информации о рецептах напитков и звонков. Ниже приведены лишь некоторые из систем, которые мы поддерживаем. Не видите свой POS? Позвоните нам и мы проверим.
NCR Aloha
ТОРТ
Clover
Digital Dining
Focus
Future
Halo
Harbour Touch
InfoGenesis
Maitre’D
MicrosOrdyx
PointOS
Revel
Revention
Rezku
SoftTouch
Square
Toast4 Touch Bistro
4 + многое другое!
партнерства
СТАНЬТЕ ПАРТНЕРОМ
BarVision сотрудничает со многими партнерами в области POS, бухгалтерского учета, инвентаризации и F&B, чтобы предоставить клиентам бизнес-аналитику.
Facebook-f Linkedin
Советы и рекомендации — подпишитесь на нашу электронную почту
- Название*
- Ваша электронная почта*
Связаться с США
- 484-730-2000
- [Электронная почта
- Фила.
© 2022 Барвижн | Все права защищены.
Дополнение: чашки с агаром для заливки LB
Введение
Плазмиды могут нести один или несколько генов устойчивости к антибиотикам, которые придают устойчивость к определенному антибиотику бактериям, их переносящим. Наличие гена устойчивости к антибиотикам на плазмиде позволяет исследователям легко изолировать бактерии, содержащие эту плазмиду, от бактерий, которые ее не содержат, путем искусственного отбора (то есть выращивания бактерий в присутствии антибиотика).
Бульон Луриа (LB) — это богатая питательными веществами среда, обычно используемая для культивирования бактерий в лаборатории. Добавление агара к LB приводит к образованию геля, на котором могут расти бактерии, поскольку они не могут переваривать агар, но могут получать питание из LB внутри. Добавление антибиотика в этот гель позволяет отбирать только те бактерии, которые обладают устойчивостью к этому антибиотику, что обычно обеспечивается плазмидой, несущей ген устойчивости к антибиотику. Следующий протокол позволит вам сделать свои собственные чашки LB/агара с интересующим вас антибиотиком.
Последняя загрузка: 14 сентября 2016 г.
Видео о протоколе
Перед тем, как приступить к этому протоколу, посмотрите приведенное ниже видео о протоколе, чтобы получить представление о том, как работает весь процесс.
Оборудование
- Автоклав
- Водяная баня
- Пипетман
Реактивы
Концентрации антибиотиков
Антибиотик Рекомендуемая концентрация запаса Рекомендуемая рабочая концентрация Ампициллин 100 мкг/мл Блеоцин 5 мг/мл 5 мкг/мл Карбенициллин* 100 мг/мл 100 мкг/мл Хлорамфеникол 25 мг/мл
(растворить в EtOH)25 мкг/мл Кумермицин 25 мг/мл
(растворить в ДМСО)25 мкг/мл Гентамицин 10 мг/мл 10 мкг/мл Канамицин 50 мг/мл 50 мкг/мл Спектиномицин 50 мг/мл 50 мкг/мл Тетрациклин 10 мг/мл 10 мкг/мл Примечание: Если не указано иное, порошок антибиотика можно растворить в dH 2 O.
*Примечание: Карбенициллин можно использовать вместо ампициллина. Карбенициллин более стабилен, поэтому он потенциально более эффективен при отборе только бактерий, содержащих интересующие плазмиды (например, будет расти меньше сателлитных колоний). Тем не менее, это также дороже.
Процедура
Отмерьте 37 г предварительно смешанного порошка LB-агара на литр расплавленного агара, который вы хотите приготовить. Точная масса, которую вы отмеряете, будет зависеть от количества тарелок, которые вы хотите разлить.
Например: Поскольку мы хотим изготовить 20 планшетов, а наши планшеты могут вмещать максимум 10 мл, нам потребуется всего 200 мл среды.
Важно отметить, что на самом деле мы делаем чуть больше 200 мл (~ 220 мл) на случай, если что-нибудь прольется или возникнут небольшие ошибки в измерениях.
Вы также всегда должны делать немного больше смеси gel-ager, чем, по вашему мнению, вам понадобится.Итак, на 220 мл LB-агара нам потребуется:
(37 г предварительно перемешанного порошка LB-агара/л) x (0,220 л) = 8,14 г предварительно перемешанного порошка LB-агара.
- Перенесите отмеренный порошок LB-агара в бутыль подходящего размера для автоклавирования. Мы делаем 400 мл агара в 1 л флаконах и 200 мл агара в 500 мл флаконах. Дополнительный пустой объем необходим для предотвращения выкипания расплавленного агара в автоклаве.
- Перелейте стерильную воду (в нашем случае 220 мл) в ту же бутыль и перемешайте, чтобы образовался коллоид среды/агара.
- Закройте горлышко флакона крышкой или алюминиевой фольгой (но не герметично!) и заклейте флакон автоклавной лентой. Лента автоклава потемнеет во время процесса автоклавирования, если ваш образец провел не менее 10 минут при температуре 121 ℃. Используйте лабораторную ленту, чтобы пометить бутылку своими инициалами, датой и содержимым бутылки. Это устранит любую путаницу позже, если вы забудете бутылку в автоклаве.
- Поместите гелевую смесь в автоклав и прогоните при температуре образца не менее 121 ℃ при давлении 20 фунтов на кв. дюйм в течение не менее 30 минут. Высокое давление предотвратит выкипание гелевой смеси при высокой температуре.
*Pro-Tip* Хотя рекомендуемая нами температура должна убить большинство потенциальных загрязнителей, некоторые виды спор упорно выживают даже в суровых условиях автоклава. Обязательно ознакомьтесь с литературой по соответствующей технике стерилизации, если вы работаете с какими-либо странными и удивительными организмами.
- Пока ваши образцы стерилизуются в автоклаве, вы должны подготовить станцию для заливки чашек:
- Приготовьте антибиотики. Перед добавлением антибиотика в расплавленную гелевую смесь необходимо приготовить исходный раствор с увеличением 1000x.
- Подготовьте водяную баню при температуре 60 ℃ с достаточным количеством воды, чтобы погрузить ~ 75% бутылки, содержащей расплавленную гелевую смесь.
*Pro-Tip* Перед добавлением антибиотика расплавленный агар следует охладить на водяной бане. 60 ℃ — хорошая температура, потому что расплавленный агар останется жидким при этой температуре, но большинство антибиотиков не разрушатся при этой температуре. Обратитесь к производителю вашего антибиотика, чтобы убедиться, что это верно в вашем случае.
- Достаньте расплавленную агаровую смесь из автоклава.
*Pro-Tip* После завершения цикла автоклава мы рекомендуем приоткрыть дверцу автоклава и оставить ее открытой примерно на 10 мин. Это позволит парам выйти из автоклава и немного охладит гель-микс. Тем не менее, вы всегда должны использовать термоизолирующие перчатки при извлечении чего-либо из автоклава.
- Частично погрузите расплавленную гелевую смесь в водяную баню с температурой 60 ℃.
- Зажгите пламя на станции заливки планшетов и разведите антибиотик в расплавленной гелевой смеси ~60 ℃, используя стерильную технику.
- Встряхните бутылку с агаром, чтобы обеспечить равномерное распределение антибиотика по агару.
- Открывайте по одной тарелке рядом с пламенем и начинайте наливать. Отмерьте желаемое количество агара пипеткой для первой чашки, чтобы получить представление о том, как выглядит этот объем в вашей конкретной чашке.
- Для остальных тарелок наливайте прямо из бутылки.
*Pro-Tip* Обязательно перемешайте чашки после заливки, чтобы удалить пузырьки и обеспечить равномерное распределение агара по дну чашки. Закрывайте каждую тарелку после наливания и складывайте по мере наливания.
*Pro-Tip* Если агар частично затвердевает в бутылке во время заливки, следует прекратить заливку и заново приготовить гель-микс. Если вы готовите чашки без антибиотика, вы можете повторно разжижать агар, снова пропуская его через автоклав или разогревая в микроволновой печи (если вы используете микроволновую печь, остерегайтесь чрезмерного кипячения!).
- Оставьте свои тарелки на скамейке, чтобы они затвердели.
*Pro-Tip* Наши пластины затвердевают примерно через 30 минут при комнатной температуре, однако мы оставляем их при комнатной температуре на ночь, чтобы дать им высохнуть. После ночного высыхания пластины помещаем в полиэтиленовый пакет с абсорбирующим материалом для уменьшения образования конденсата. Затем планшеты хранят при температуре 4 ℃ до использования.
- После того, как ваши пластины затвердеют и высохнут, вы должны проверить их, чтобы убедиться, что антибиотик действует правильно:
- Выньте две тарелки.
- На первой чашке нанесите штрихом штамм, который, как вы знаете, устойчив к антибиотику.
- На втором планшете штрихом отметьте штамм, не устойчивый к антибиотику.
- Инкубируйте оба планшета в течение ночи при соответствующей температуре роста и проверьте рост. См. наш раздел образцов данных ниже для положительных и отрицательных результатов теста.
Например: Если вы будете готовить планшеты с конечной концентрацией ампициллина 100 мкг/мл, вам следует приготовить исходный раствор с концентрацией 100 000 мкг/мл (100 мг/мл). Просто отмерьте 100 мг порошка ампициллина, добавьте его в 1 мл воды, растворите встряхиванием и простерилизуйте.
*Pro-Tip* Вы должны оставить расплавленную гелевую смесь на водяной бане не менее чем на 5 минут. Не допускайте, чтобы вода из водяной бани касалась горлышка или верхней части бутылки, так как эта вода вряд ли будет стерильной. Охлажденный агар должен быть теплым на ощупь; Как правило, если вы не можете вынуть расплавленный агар из водяной бани в одних лабораторных перчатках, он вряд ли будет достаточно прохладным для добавления в него антибиотика. Чтобы убедиться, что ваш агар имеет правильную температуру, мы рекомендуем использовать лазерный термометр.
Данные пробы
Во всех приведенных ниже случаях (-) означает, что тестируемый штамм не должен быть устойчивым к антибиотику, (+) означает, что тестируемый штамм должен быть устойчивым к антибиотику.
Положительный результат: растет только устойчивый штамм
Если все было подготовлено должным образом, вы должны увидеть рост только устойчивого штамма. Если вы получите этот окончательный результат, ваши планшеты готовы к использованию или хранению при 4 ℃. Вы не должны хранить свои пластины дольше 1 месяца при любой температуре и всегда должны проверять их на загрязнение перед использованием.