Раствор для блоков фбс: Норма расхода раствора на монтаж блоков ФБС: пример расчета

Норма расхода раствора на монтаж блоков ФБС: пример расчета

Содержание

1. Расход раствора на ФБС блоки:
2. Достоинства строительных элементов:
3. Отрицательные характеристики стройматериала:
4. Монтажные работы
5. Особенности укладки
6. Постройка прерывистого ленточного фундамента из блоков ФБС
7. Ход работ:

ФБС – фундаментные блоки стен, подходящие для сооружения зданий различного предназначения. При эксплуатации допустимы колебания температур не выше +50 и не ниже -70 градусов Цельсия. Применение элементов из бетона ФБС при возведении домов в различных климатических условиях и на разных видах почвы. В сравнении с монолитным типом фундаментной конструкции, монтаж блоков ФБС производят при различных погодных условиях, а приступить к укладке стен, рекомендуется после того как работы по установке конструкции будут завершены. Норма расхода раствора на монтаж блоков ФБС будет составлять 10-20% от объемной части строительных элементов. Многое будет зависеть от типа и габаритов изделий.

Зная расход раствора на монтаж блоков ФБС, осуществляют установку строительных единиц за кратчайший период и при этом не привлекают квалифицированных мастеров для произведения расчетов. Такая методика позволит существенно сократить список расходов и при этом не потерять характеристики качества и надежности возводимой постройки.

Популярные марки сборных бетонных блоков:

• ФБС 24-4-6;
• ФБС 12-4-6;
• ФБС 9-4-6;
• ФБС 6-4-6.

Характеристики плотности блочного материала – 2,15 т/м3. Плотность строительной смеси 1,55 т/м3. Расход раствора при монтаже блоков ФБС составит 0,07 м3 на 1 м3 кладки. Для примера возьмем раскладку блоков для фундаментного основания из 28 строительных единиц тип ФСБ 12-4-6 и 8 блоков ФБС 9-4-6.

V (бет.бл.) = S(бет.) х H(кладки) = 8,21м2х1,23м = 10,09м3

Расход раствора на ФБС блоки:

V(раствора) = 0,07 х V (бет.) = 0,07х10,09м3 = 0,7м3;

m(раствора) =1,55m/м3 х 0,7м3 = 1,08 m;

Формула расчета общей массы бетонных блоков:

m(бет. блока) = 2,15m/м3 х 28 х V (12-4-6) + 2,15m/м3 х 8 х V(9-4-6) = 2,15m/м3 х 28 (1,2х0,4х0,6)+2,15m/м3 х 8 (0,9х0,4х0,6) = 21,06 m

Для того чтобы увеличить несущие особенности основы, бетонные элементы ФБС укладывают на фундаментные подошвы ФЛ. Главное качество ФЛ – возможность расширения площади опорной конструкции.

Для расчета нормы расхода раствора на кладку ФБС при строительстве фундаментов для зданий необходимо знать, что изделия имеют стандартную длину – 2,4 м, 1,2 м, 0,9 м, показатели высоты всегда равны 0,6 м. Блоки имеют ширину: 30, 40, 50, 60 сантиметров и должны быть не менее размера ширины стен здания. Общая норма расхода блоков фундамента будет равна, количеству изделий в ряду, умноженному на нужное количество рядов.

Достоинства строительных элементов:

• быстрота и простота монтажа достигается за счет фиксированной конструкции бетонных изделий;
• высокие показатели практичности. Каждая строительная единица изготовлена на заводском производстве с четкими соблюдениями норм и правил СНиП и ГОСТ;
• длительные сроки эксплуатации;
• небольшой расход раствора на монтаж ФБС;
• благодаря добавлению в сырье при изготовлении специальных присадок, которые увеличивают стойкость к минусовым температурам.

Отрицательные характеристики стройматериала:

• высокая итоговая стоимость фундаментного основания – транспортировка на строительный участок и применение услуг спецтехники при монтаже;
• при укладке требуется дополнительно проложить гидроизоляционный материал. В основной состав блоков входит бетон, который имеет хорошую восприимчивость к влажной среде;
• потребуется теплоизоляционный защитный слой. Самое слабое место фундаментной конструкции из ФБС – соединительные швы. В зимний период сезона повышенное количество атмосферных осадков в сочетании с сильными морозами негативным образом отражаются на связующей смеси для блоков. Что приводит к образованию пустот и нарушению целостности фундамента.

Почему блоки ФБС для основы лучше, чем сооружение монолитного фундамента? Существенным плюсом является, то, что фундаментные блоки стен возводят при любых типах грунта и в любых климатических зонах. В сравнении с монолитным основанием, производить монтаж блоков ФБС можно при различной погоде. Но, устанавливать фундамент на поверхность, покрытую слоем грязи, воды, либо снежной массы не допустимо.

Монтажные работы

1. Строительную площадку расчищают.
2. Производят разметку местности.
3. Копают котлован или траншею, с расчетом ширины для свободной кладки блоков.
4. Производят выравнивание грунтовой основы до проектных данных.
5. Если тип грунта песчаный, монтаж следует производить непосредственно на песчаную подошву, которую следует утрамбовать тщательным образом. Рекомендованная толщина 5-10 сантиметров.
6. Габариты основы из песка делают на 20-30 сантиметров больше размеров фундаментных элементов, это требуется для предотвращения изделий с песчаной подушки.
7. Перед монтажом в углах и в зонах пересечения стен устанавливают маячные элементы.
8. Отвес опускается с осевых проволочных конструкций, которые натягивают по периметру.
9. Перед стыковкой строительных элементов, нужно проверить что техника расположена на безопасном расстоянии от края котлована, а его опорные части находятся вне зоны возможного обрушения грунта.

Монтажные блоки укладывают на строительную смесь по типу кирпичной кладки. Стандартные размеры высоты – 4-5 рядов. При этом необходимо произвести обвязку внутренних и внешних стен. ФСБ укладывают на бетонный раствор с перевязкой швов по вертикали, рекомендованная глубина – не меньше 0.4 от высоты строительной единицы при малосжимаемом типе грунта и не меньше 60 см — полная высота блока при сильносжимаемом, посадочном и влаговпитывающем типе грунта. Наиболее подходящая смесь – 1 часть цемента М500 и 3 части песка.

Особенности укладки

Укладывают изделия на бетонную смесь, толщина которой составляет 2 см. Чтобы качество швов получилось лучшим, раствор нужно выравнивать рейкой по периметру. Межблочные швы по вертикали и горизонтали заполняют раствором и расшивают с обеих сторон.

Стыки по вертикали во время монтажных работ заполняют бетоном, уплотнение производят методикой штыкования. Когда размеры длины фундаментных изделий не кратны длине сторон постройки, промежуточные зоны заполняют доборными элементами либо монолитными пломбами. При укладке, между блоками следует оставлять место для электропроводки и трубопровода.

В варианте, когда размер блока ленточного сборного фундамента тоньше, чем стена самого дома, по причине того, что надземная часть изготовлена из менее прочного стройматериала. По нормативам допустим свес стен постройки не больше 13 сантиметров.

Небольшие отклонения рекомендуется устранять, изделия передвигаются при помощи лома. Если блок установлен с отклонениями, которые превышают допустимую норму, его, следует выравнивать краном. Элемент поднимают, после отводят в сторону, основу выравнивают.

Установка фундаментных элементов на песок может привести в дальнейшем к проблемам, потому что песок подвержен размытию грунтовыми водами, что увеличивает риск возникновения перекоса постройки.

Постройка прерывистого ленточного фундамента из блоков ФБС

Перед тем как приступить к работам по монтажу фундаментных стеновых блоков, рекомендуется по всем правилам подготовить подушку под фундамент.

Ход работ:

1. Когда грунт под фундамент будет изъят из траншеи, ее дно утрамбовывают.
2. Монтируется каркас, лучше его сбить из брусков. Габариты рамы должны быть больше на 20-30 сантиметров от размера подушки фундаментной основы. Конструкция монтируется на дно котлована, ее расположение должно быть строго горизонтальное.
3. Все внутреннее пространство засыпают песком. Рекомендованная толщина слоя не меньше 15 см.
4. Песчаный слой равняют рейкой и обильно поливают водой. По мере того как он будет оседать песок досыпают еще, снова трамбуют и поливают водой. Эта методика используется для полной ликвидации скопления воздуха.
5. В качестве второго слоя в 5 см послужит щебенка с фракцией 2-4 см. Щебень разравнивают и трамбуют.
6. Для увеличения прочности фундаментной основы из стенового блока, следует сделать армопояс. Рекомендуется использовать арматуру марки Ф12. Стержни укладывают и сваривают. Каркас формируют из проволоки D4.
7. Металлический каркас заливают бетонным составом, толщина слоя 20 см и ширина 30 см.

Далее работы приостанавливаются на 2-3 суток, бетон должен полностью затвердеть.

Нельзя чтобы под подошвой фундаментной основы оставался насыпной либо разрыхленный грунт.

Раствор для фундамента: пропорции и технология приготовления

Марки бетона для фундамента

Уже на стадии проектирования возникает вопрос: какой маркой цементный раствор лучше всего использовать для будущего основания? Многим кажется, что особой разницы между марками цементного раствора не существует.

Однако, это далеко не так – на выбор того или иного вида бетона оказывает влияние целый ряд факторов:

• Особенности почвы участка: уровень грунтовых вод, глубина промерзания и т. д.
• Конструкция и тип будущего фундамента: монолитный, в виде кирпичной кладки, из блоков ФБС.
• Размеры будущего дома. Чем больше удельный вес строения, тем выше должна быть прочность бетонного основания.

К примеру, для заливки ленточного или столбчатого фундамента понадобиться смесь, в состав которой входят цемент, щебень (гравий), песок и вода. Это бетонный раствор марки М300 или М400 – точные пропорции для приготовления такой смеси регламентированы строительными нормативами СНиП.

Чтобы сделать кирпичное основание, применяется обычный строительный раствор для кладки. Его же можно использовать и для монтажа фундаментных блоков. Однако в последнем случае часто применяется и так называемый «тощий бетон». Своё название он получил из-за малой пропорции цемента в общем объёме бетонной смеси.

Для получения качественного раствора необходимо чётко соблюдать рекомендуемые пропорции всех компонентов.

Бетон для монолитного фундамента

Монолитная конструкция фундамента является наиболее популярной как в строительной промышленности, так и в частной застройке. Она отличается простотой изготовления и в то же время долговечностью, при условии соблюдения рекомендуемых пропорций состава.

Конечно, самым простым выходом будет заказать готовый бетон, произведённый в соответствии со всеми нормативами на бетонно-растворном узле. Но далеко не каждому такой вариант будет доступен – прежде всего, из-за его высокой стоимости. Поэтому большинство частных застройщиков предпочитают сделать бетон для заливки фундамента своими руками.

Чтобы получить качественный бетон, способный прослужить не одно десятилетие, нужно использовать качественные ингредиенты, смешанные в правильных пропорциях.

Основные составляющие бетона для монолитного фундамента, в расчёте на 10 кг цемента (в соответствии с требованиями СНиП):

1. Вяжущий компонент: цемент марки 300 или 400 – 10 кг. Использовать цемент марки 500 не представляется целесообразным. Во-первых, его стоимость гораздо выше; во-вторых, разница в технических характеристиках не играет в этом случае решающей роли.
2. Мелкофракционный наполнитель: песок – 30 кг. Он может быть как речным, так и карьерной крошкой (отсевом). Недопустимо содержание в составе бетонной смеси органических примесей – земли, ила. Это значительно снижает его качество.
3. Крупнофракционный наполнитель: щебень или гравий – 50 кг. Допустима их замена промытой галькой, но это также несколько снижает качество раствора. Дело в том, что у гладкой поверхности гальки хуже коэффициент сцепки с вяжущими компонентами.
4. Вода. Рекомендуется использовать чистую воду, в количестве вдвое меньшим по массе, чем общий вес сухих компонентов (цемента, песка и гравия). В случае, если бетон получается излишне густым, следует несколько увеличить процентное содержание воды. Излишне жёсткий бетон при заливке не заполняет всё пространство опалубки, оставляя «раковины». Следует также учитывать, что песок в своём составе уже содержит некоторое количество воды.

Для того, чтобы правильно сделать бетонный раствор, следует использовать только промытый песок, очищенный от примесей чернозёма и ила. Согласно нормам, доля органических примесей в песке не должна превышать 3%.

Кроме вышеперечисленных основных компонентов, в состав монолитного бетона добавляются также пластификаторы, противоморозные присадки. Они значительно улучшают его качество, а также позволяют производить работы при отрицательных температурах.

Раствор для кирпичных фундаментов

Кроме оснований из монолитного бетона, в строительстве часто применяются фундаменты из кирпичной кладки. Чаще всего они выполнены в виде стен цокольных этажей и технологически ничем не отличаются от обычной строительной кладки.

Раствор для кирпичной кладки может быть нескольких видов:

• известковый;
• цементно-известковый;
• цементный.

Известковый

Сделать такой раствор достаточно просто – для его приготовления не требуется цемент. В его состав входит просеянный песок и гашёная известь в пропорциях 3 к 1. Однако, подобный состав по прочности гораздо уступает цементным. Поэтому использовать его для строительства фундамента не рекомендуется.

Цементно-известковый

В его состав кроме извести и песка, также входит цемент. При этом известь замачивают, получая известковое молоко. На нём и следует замесить сухую смесь из песка и цемента, доведя её до консистенции густого теста. Известь делает раствор намного пластичнее и удобнее в использовании.

Но вместе с тем несколько снижает показатели прочности. Поэтому, цементно-известковый раствор не используют для кладки несущих элементов фундамента. Как правило, он применяется при заполнении кирпичами проёмов столбчатого или свайного оснований.

Цементный

Это наиболее прочный вид кладочного раствора, широко применяемый в строительстве. Для его приготовления понадобится цемент, очищенный песок или строительная крошка (отсев) и вода. Пропорции сухой смеси могут меняться от того, раствор какой марки необходимо приготовить. Так, для марки 50 берётся цемент и песок в пропорции 1 к 6.

Для того, чтобы правильно сделать более прочный раствор для фундамента, необходимо изменить пропорции в сторону увеличения массовой доли цемента. Для кладки несущих стен цокольного этажа или подвала применяется раствор марки М150-М200. Соотношение песка и цемента в данном случае составляет 1:3.

Кладка кирпичей всегда производится на бетонное основание – ростверк или подушку. Нежелателен также прямой контакт кирпичей с грунтом – кирпичные фундаменты должны быть оборудованы гидроизоляцией.

Посмотрите видео, как правильно изготовить бетон для дальнейшей его заливки своими руками.

«Тощий» бетон

Другим распространённым типом фундаментов, часто применяемых при строительстве как крупных объектов, так и частных домов, – блочный. Монтируется он из стандартных бетонных блоков ФБС, скрепляемых между собой цементным раствором. Укладка блоков производится на песчаную или гравийную подушку, которую часто скрепляют так называемым «тощим» бетоном. Им же часто скрепляют и бетонные блоки, заделывая торцевые отверстия смежных блоков.

Особенностью «тощего» бетона является значительное уменьшение пропорций воды и цемента в общей массе раствора. Из-за этой особенности данная разновидность раствора для фундамента и получила своё наименование. Применяется «тощий» бетон там, где не столь критичны показатели крепости сцепки. Это позволяет значительно сэкономить при строительстве на самом дорогостоящем компоненте бетона – цементе.

Для приготовления «тощего» бетона берётся песок, гравий и цемент. Причём цемент составляет всего лишь 5-10% от общей массы готовой смеси. Доля воды также невысока, так что по своей консистенции «тощий» бетон больше напоминает сырую землю.

Все приведённые выше разновидности раствора для фундамента должны использоваться исключительно там, где это регламентировано нормативами СНиП. Только при соблюдении данных нормативов и соблюдении пропорций возможно изготовить качественный раствор для заливки фундамента и возвести максимально прочный фундамент для любого дома.

стратегий блокировки для IHC | Thermo Fisher Scientific

Перед использованием специфических антител для обнаружения антигенов с помощью иммуногистохимии (ИГХ) все потенциальные сайты неспецифического связывания в образце ткани должны быть заблокированы, чтобы предотвратить связывание неспецифических антител. Если блокирование отсутствует или является неадекватным, антитела или другие реагенты для детекции могут связываться с различными сайтами, не связанными со специфической реактивностью антитело-антиген. Например, антитела могут связываться со многими типами поверхностей путем простой адсорбции, и они могут связываться с белками благодаря зарядовым, гидрофобным и другим типам взаимодействий.

Обзор продуктов IHC Обзор иммуногистохимии

Содержание страницы

• Введение
• Типы блокирующих буферов
• Блокирующие наконечники

В принципе, любой, который не связывается специфически с белком-мишенью и другими антителами или реагентами для обнаружения в анализе можно использовать для блокирования. На практике, однако, некоторые белки работают лучше, чем другие, потому что они легко связываются с неспецифическими сайтами (также называемыми реактивными сайтами) при нейтральном pH или стабилизируют функцию других компонентов анализа. Однако ни один белок или смесь белков не подходят лучше всего для всех экспериментов ИГХ, и эмпирическое тестирование имеет решающее значение для получения наилучших возможных результатов для данной комбинации специфических антител и других реагентов для обнаружения. В приведенном ниже примере блокирующий буфер Thermo Scientific Blocker BSA использовали в эксперименте с флуоресцентной ИГХ для обнаружения белков виментина и ламина B1.

Флуоресцентная ИГХ для обнаружения виментина и ламина B1 в нормальной ткани толстой кишки. Срезы нормальной ткани толстой кишки человека блокировали блокирующим буфером Blocker BSA (кат. № 37520, 37525) перед инкубацией с мышиным анти-виментином (например, № MA5-14564) и кроличьим анти-ламином B1 (например, кат. .& #MA1-06103) первичные антитела. В качестве вторичных антител использовались меченные Invitrogen DyLight 405 козьи антимышиные IgG& (кат. № 35501BID, синий сигнал) или меченые DyLight 550 козьи антикроличьи IgG (кат. № 84541, розовато-оранжевый сигнал) соответственно. Клеточные ядра были контрастно окрашены в зеленый цвет (например, номер по каталогу S7572)

Общие процедуры блокировки

Этап блокирования для ИГХ чаще всего выполняется после завершения всех других этапов подготовки образца, но непосредственно перед инкубацией образца с первичным антителом. Общий протокол заключается в инкубации фиксированного, встроенного, смонтированного, срезанного, депарафинированного и немаскированного образца ИГХ с соответствующим блокирующим буфером в течение от 30 минут до ночи при температуре окружающей среды или 4 °C на основе оптимизированного протокола, специфичного для каждого антитела. и целевой антиген. После стадии блокирования обычно проводят достаточную промывку для удаления избыточного белка, который может помешать обнаружению антигена-мишени. Однако многие исследователи не проводят промывку после этапа блокирования, потому что они разбавляют свои первичные антитела в блокирующем буфере.

Дополнительная информация: Руководство по устранению неполадок IHC

Типы блокирующих буферов

Нормальная сыворотка

Нормальная сыворотка с концентрацией 1–5 % (вес/объем) является распространенным блокирующим буферным компонентом, поскольку сыворотка содержит антитела, которые связываются с реактивными участками и предотвращают неспецифическое связывание вторичных антител, используемых в анализе. Однако решающим фактором является использование сыворотки вида-источника для вторичного антитела, а не вида-источника для первичного антитела. Это связано с тем, что сыворотка первичных видов антител будет связываться с реактивными сайтами, но вторичное антитело будет распознавать эти неспецифически связанные антитела вместе со специфическими антителами, связанными с антигеном-мишенью. Кроме того, сыворотка богата альбумином и другими белками, которые легко связываются с неспецифическими участками связывания белков в образце.

Белковые растворы

Помимо сыворотки, блокирующие буферы часто содержат белки, такие как бычий сывороточный альбумин (БСА), желатин или обезжиренное сухое молоко, добавляемые в конечных концентрациях 1-5% (масса/объем). Эти недорогие и легкодоступные белки по отдельности или вместе присутствуют в значительном избытке по сравнению с концентрацией антител, поэтому они конкурируют с последними за связывание с неспецифическими сайтами в образце. У многих лабораторий есть любимый рецепт самодельного блокирующего буфера. Однако важно убедиться, что такие блокирующие буферы не содержат осадков и других загрязнителей, которые могут помешать обнаружению ИГХ.

Готовые коммерческие буферы

Готовые блокирующие буферы также доступны для блокирования образцов при подготовке к обработке антителами. Эти буферы могут содержать высокоочищенные отдельные белки или запатентованные безбелковые соединения. Преимущество использования коммерческих блокаторов заключается в том, что существует множество доступных вариантов, которые работают лучше, чем желатин, казеин или другие белки, используемые по отдельности, и у них больше срок годности по сравнению с домашними препаратами.

Советы по блокированию

Мы предлагаем несколько важных советов для ваших экспериментов по блокированию:

• Контролируйте как фон (отрицательный контроль), так и силу сигнала (положительный контроль) с помощью различных блокирующих реагентов.
• Выберите блокирующий буфер, обеспечивающий максимальное отношение сигнал/шум.
• Убедитесь, что в блокирующем буфере нет веществ, которые мешают конкретному анализу. Например, обезжиренное сухое молоко содержит биотин и не подходит для использования с любой системой обнаружения , включающей биотин-связывающий белок.
• Для оптимальных условий анализа используйте тот же блокирующий буфер для разбавления антитела, который используется на этапе блокирования.

Рекомендуемая литература

1. Дакшинамурти К., Мистри С.П. (1963) J Biol Chem 238:294.

Руководство по выбору контрольных и блокирующих реагентов.

Экспериментальные протоколы с использованием иммунотехнологий часто можно улучшить за счет оптимального использования блокирующих реагентов, разбавителей и контролей.

Оптимизируйте свои экспериментальные протоколы с помощью контрольных, разбавляющих и блокирующих реагентов.

При разработке иммунотехнологии важно учитывать анализ результатов. Добавление правильных блокирующих реагентов и экспериментальных контролей может улучшить качество анализа и его интерпретацию. Включение положительных и отрицательных контролей важно при создании данных для публикации.

Используйте это руководство, чтобы узнать больше о выборе соответствующих контрольных, разбавляющих и блокирующих реагентов в ряде иммунометодов для:

• Уменьшить фон
• Устранение неполадок с нецелевыми сигналами
• Облегчить анализ.

Проточная цитометрия

Проблемы	Решение	Указанный продукт
Фон антител, связывающих Fc-рецепторы	Блокирует Fc-рецепторы.	Нормальная сыворотка хозяина меченого антитела
	Использовать F(abʹ) 2 9Вторичное антитело в формате 0121, чтобы избежать захвата Fc-рецепторами.	F(abʹ) 2 вторичные антитела
Подтверждение того, что первичное связывание антител обусловлено антигенной специфичностью	Используйте изотипический отрицательный контроль (неспецифический IgG того же вида, что и первичное антитело), ​​чтобы продемонстрировать специфическое связывание первичного антитела.	Очищенные белки ChromPure™
Подтверждение того, что вторичное антитело не влияет на нецелевой сигнал	Используйте изотипический отрицательный контроль (конъюгированный неспецифический IgG того же вида, что и вторичное антитело), ​​чтобы продемонстрировать специфическое связывание вторичного антитела.	Очищенные белки ChromPure™
Недостаток времени и отсутствие непосредственно конъюгированного первичного	Fab пометьте ваши первичные антитела перед инкубацией с образцом.	ФабуЛайт™

Вестерн-блоттинг

Проблемы	Решение	Указанный продукт
Фон (неспецифический сигнал, перекрывающий интересующие полосы)	Используйте соответствующий блокирующий реагент для блокирования мембраны перед инкубацией с первичным антителом.	Нормальная сыворотка (5% об./об.) вида-хозяина меченого антитела или БСА (5% об./об.) (без IgG и без протеазы)
	Избегайте использования молока или БСА, если используются первичные антитела, полученные от коз, лошадей или овец. Бычий IgG может взаимодействовать с антителом за счет гомологичных эпитопов близкородственных видов.	Нормальная сыворотка (5% по объему) вида-хозяина меченого антитела
Помехи от редуцированных иммунопреципитирующих (IP) антител при обнаружении белков 50 или 25 кДа	Чтобы избежать обнаружения тяжелых цепей IP-антител с молекулярной массой 50 кДа, проведите блот-зонд с конъюгированными специфическими антителами против легких цепей.	Антитела против легких цепей
	Чтобы избежать обнаружения легких цепей IP-антитела с молекулярной массой 25 кДа, проведите блот-зонд с конъюгированным анти-IgG, Fc-фрагментом, специфичным после блокирования моновалентным Fab-фрагментом анти-Fc (FabuLight™).	Анти-Fc-специфические антитела Фрагменты Fab (FabuLight™)

ELISA

Проблемы	Решение	Указанный продукт
Фон	Используйте соответствующий объем блокирующего реагента, чтобы полностью заблокировать лунки перед инкубацией с первичным антителом.	Нормальная сыворотка (5% об./об.) вида-хозяина меченого антитела или БСА (5% вес. /об.) (без IgG и без протеазы)
Нет сигнала	Используйте положительный контроль, чтобы продемонстрировать активность меченого вторичного антитела, покройте изотипом первичного антитела и непосредственно определите с помощью вторичного антитела	Очищенные белки ChromPure™

IHC

Проблемы	Решение	Указанный продукт
Подтверждение того, что первичное связывание антител обусловлено антигенной специфичностью	Используйте изотипический отрицательный контроль (неспецифический IgG того же вида, что и первичное антитело), ​​чтобы продемонстрировать специфическое связывание первичного антитела.	Протеины ChromPure™
Фон (общий)	Блокирует эндогенные сайты связывания, которые могут взаимодействовать с экспериментальными реагентами.	Нормальная сыворотка хозяина меченого антитела.
	Развести антитела в буфере без белков-носителей. Отцентрифугировать рабочий раствор для удаления агрегатов.	Правильный разбавитель и подготовка, т.е. PBS/Твин 20
Фон (распознавание гомологичного Ig)	Используйте перекрестно-адсорбированные вторичные антитела с минимальной перекрестной реактивностью к анализируемым видам клеток или тканей.	Вторичные антитела Min X
	Блокируют эндогенные иммуноглобулины.	Фрагменты Fab
Множественное мечение первичных антител от одного и того же вида хозяина (например, мышь на мыши)	Используйте Fab-фрагменты в предлагаемых протоколах для выполнения множественной маркировки (см. онлайн).	Fab-фрагменты
	Иммунологическая метка первичного антитела перед инкубацией.	ФабуЛайт™
Эндогенные ферменты	Инактивация эндогенных пероксидаз перекисью водорода.	Перекись водорода
	Инактивация эндогенных фосфатаз левамизолом.	Левамизол
Эндогенный биотин	Блокирует эндогенный биотин.	Инкубируйте со стрептавидином, а затем со свободным биотином.
Ионные или гидрофобные взаимодействия	Включите моющее средство в буферы, оптимизируйте концентрацию соли и pH.	Твин 20 и/или Тритон Х-100

Иммунореагенты

Компания Jackson ImmunoResearch предлагает широкий спектр иммунореагентов, предназначенных для повышения эффективности и простоты анализа. Приведенные ниже иммунореагенты выделены в этом руководстве. Посетите наш веб-сайт или ознакомьтесь с нашим каталогом для получения дополнительной информации о широком ассортименте вторичных антител и конъюгатов, производимых компанией Jackson ImmunoResearch.

• Нормальные сыворотки
• Очищенные белки ChromPure™ из нормальных сывороток
• Моновалентные Fab-фрагменты, аффинно-очищенные антитела
• Бычий сывороточный альбумин, не содержащий IgG и протеазы

Нормальные сыворотки

Нормальные сыворотки получают от неиммунизированных животных и, следовательно, не обнаруживают какой-либо специфический антиген. Обычная сыворотка, разбавленная до 5% (об./об.) в PBS (или аналогичном буфере), настоятельно рекомендуется в качестве блокирующего агента для снижения фона от неспецифического связывания с консервативной последовательностью и/или Fc-рецептором. Наилучшие результаты получаются с разбавленной нормальной сывороткой того же хозяина, что и меченое антитело, используемой в качестве отдельного этапа инкубации перед добавлением первичного антитела.

Обзор нормальных сывороток

ChromPure™ Очищенные белки из нормальных сывороток

Белки ChromPure™ в основном используются в качестве экспериментальных контролей первичных или вторичных антител. Их также можно использовать в качестве блокирующих реагентов для Вестерн-блоттинга, IHC и IF. Белки ChromPure™ получают из сыворотки неиммунизированных животных и не распознают какие-либо известные антигены. Их готовят с использованием различных хроматографических методов, чтобы получить материал без загрязняющих молекул вплоть до концентрации 20 мг/мл, что делает их идеальными для использования в качестве экспериментальных контролей для наиболее чувствительных анализов. Белки ChromPure™ доступны в различных форматов для многих видов, включая цельный иммуноглобулин, F(ab’) ₂ и Fab-фрагменты.

Также доступны человеческий IgM, сывороточный IgA и другие белки. Компания Jackson ImmunoResearch предлагает широкий спектр конъюгатов для этой линейки продуктов, в том числе ряд флуоресцентных красителей и репортерных ферментов, позволяющих изолировать сигнал, полученный в результате неспецифических взаимодействий.

Просмотреть очищенные белки ChromPure™

Моновалентные Fab-фрагменты

Affinity-Purified AntibodiesFab-фрагменты можно использовать для блокирования эндогенных иммуноглобулинов с целью уменьшения фонового окрашивания и двойного мечения первичных антител одного и того же вида-хозяина. В следующем примере показано, как можно использовать Fab-фрагменты для блокирования эндогенных иммуноглобулинов при использовании мышиных первичных антител на ткани мыши.

Просмотреть моновалентные Fab-фрагменты

Бычий сывороточный альбумин, не содержащий IgG и протеаз

Бычий сывороточный альбумин (БСА) широко используется в качестве белка-носителя для разбавления антител и в качестве общего блокатора белка в иммуноанализах и протоколах иммунодетекции. Если BSA является желательным разбавителем или блокирующим реагентом для вашего анализа, важно использовать BSA, который подходит для этой цели.

Большинство продуктов BSA, в том числе те, которые продаются как не содержащие обнаруживаемых IgG, загрязнены низкими уровнями бычьего IgG.

Бычьи IgG имеют много общих эпитопов с козьими, овечьими и лошадиными IgG и могут стать мишенью для вторичных антител, направленных против этих видов (исключение составляют бычьи антикозьи IgG). Это может произойти и с другими антителами, которые перекрестно реагируют с бычьим IgG. Взаимодействие может привести к потере активности антител и/или увеличению фона. Фон может возникать из-за липких, растворимых иммунных комплексов или из-за неспецифического связывания контаминирующего бычьего IgG, привлекающего перекрестно реагирующие меченые вторичные антитела.

Бычий сывороточный альбумин Jackson ImmunoResearch не содержит IgG и протеазы. Он не содержит загрязняющих IgG, что устраняет общие проблемы иммуноанализа, связанные со многими коммерческими препаратами БСА высокой чистоты.